Em geral

Purina cat ração cuidados especiais esterilizados 15 kg

Purina cat ração cuidados especiais esterilizados 15 kg

Purina cat ração cuidados especiais esterilizados 15 kg, 6 meses e 12 meses de idade.

Todos os animais foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos de tratamento (8 em cada grupo): um grupo de controle alimentado com dieta basal sem * H. infecção por pylori * (grupo controle), a * H. grupo infectado com pylori * (grupo Hp), um grupo probiótico alimentado com dieta basal mais 10 ^ 9 ^ UFC * B. lactis * duas vezes dly (grupo BL) e a * H. grupo infectado com pylori * mais probiótico (grupo Hp-BL). * H. pylori * foram administrados duas vezes por dia (de manhã e à noite) em uma dose de 10 ^ 9 ^ UFC de bactérias viáveis ​​por gavagem por 12 semanas. O probiótico foi administrado duas vezes ao dia (de manhã e à noite) por 12 semanas, começando 3 dias antes da administração de * H. pylori *.

Os animais foram alojados em gaiolas ventiladas individualmente e as gaiolas foram limpas e desinfetadas entre cada grupo de tratamento, seguindo o protocolo relatado por Piazza et al. [[@ B40] ].

2.4. Infecção por H. pylori e avaliação da gastrite {# sec2.4}

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* H. A infecção por pylori * foi induzida em camundongos SPF C57BL / 6 machos por gavagem oral com uma suspensão de * H. pylori * (1 × 10 ^ 8 ^ CFU / ml) em 0,5 ml de caldo Brucella, preparado conforme relatado por Gisbert et al. [[@ B41] ], e confirmado conforme descrito anteriormente por vários autores [[@ B42] - [@ B44] ].

Os animais foram monitorados lentamente e os sintomas clínicos de gastrite foram avaliados por avaliação endoscópica, usando uma escala de 0--4 (0: mucosa gástrica saudável, 1: vermelhidão ou hemorragia petequial leve na mucosa, 2: mucosa avermelhada com leve nodular, 3 : mucosa avermelhada com nodular, 4: vermelhidão e nodular grave). Ao final do estudo, todos os animais foram sacrificados por deslocamento cervical. Amostras de sangue, mucosa antral gástrica e soro foram coletadas para análises posteriores.

2,5. Análise Histopatológica {# sec2.5}

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Após o sacrifício dos animais, o antro foi imediatamente dissecado e fixado em formol a 10% por pelo menos 24 he processado conforme descrito anteriormente por Gisbert et al. [[@ B41] ]. Em seguida, as amostras foram incluídas em parafina, seccionadas em série com espessura de 4 * μ * m, marcadas com hematoxilina-eosina (HE) para avaliação da patologia da mucosa gástrica e examinadas em microscópio de luz. O dano histopatológico foi avaliado de forma cega única. Para a pontuação histológica, um patologista avaliou o grau de infiltração de neutrófilos (0, nenhum, 1, leve, 2, moderado, 3, grave), erosão epitelial (0, nenhum, 1, leve, 2, moderado, 3, grave) , necrose epitelial (0, nenhuma, 1, rara, 2, focal, 3, extensa), metaplasia de células mucosas (0, nenhuma, 1, leve, 2, moderada, 3, grave) e hemorragia (0, nenhuma, 1 , leve, 2, moderado, 3, grave). A média das pontuações por rato foi calculada como a pontuação histológica. A pontuação total para cada animal foi a pontuação média para todas as lesões na mucosa do estômago.

2.6. Medição de citocinas da mucosa antral sérica e gástrica {# sec2.6}

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O sangue foi coletado da aorta abdominal e o soro foi obtido por centrifugação a 3000 rpm por 15 min a 4 ° C. Após a coleta de sangue, os camundongos foram sacrificados por deslocamento cervical. A mucosa antral gástrica foi removida, lavada com PBS e pesada antes da homogeneização em PBS (4 ° C) e centrifugação (4 ° C, 13000 rpm, 15 min). O teor de proteína foi determinado pelo método de Lowry. As concentrações de IL-17, IL-10, IL-12p70, TNF- * α *, IFN- * γ *, IL-2 e IL-6 foram medidas no soro e nos homogenatos da mucosa gástrica com um kit ELISA comercial (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, EUA) de acordo com as instruções do fabricante.

2.7. Atividade antimicrobiana de H. pylori no sobrenadante de cultura de B. lactis {# sec2.7}

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B. lactis strns foram cultivados durante a noite a 37 ° C em caldo brn heart infusion (BHI) (Difco, Becton Dickinson, Sparks, MD, EUA), e o sobrenadante foi obtido por centrifugação (4000 rpm, 15 min, 4 ° C) e filtrado através de uma membrana de 0,22 * μ * m. * H. pylori * foi cultivado por 24 h a 37 ° C em placas de ágar sangue Brucella (bioMérieux, Marcy-l 'Étoile, França) suplementado com 5% de sangue de cavalo (Blood Grouping Department, Health Department, Sassari, Itália). * H. pylori * foi então colhido e suspenso em caldo BHI. Para analisar a atividade antimicrobiana do sobrenadante, 100 * μ * l de diferentes concentrações do sobrenadante foram misturados com 100 * μ * l de * H. pylori * suspensão e a mistura foi cultivada durante 24 h a 37 ° C. O crescimento bacteriano foi detectado pela densidade óptica (DO) do caldo de cultura em um comprimento de onda de 600 nm. Para verificar se o


Assista o vídeo: Purina Gatsy (Janeiro 2022).